Virus hepatitisa C so našli v različnih telesnih tekočinah (slini, semenski tekočini, nožničnih izločkih, seču, solzah, tekočini trebušne votline), vendar je za prenos okužbe pomembna le okužena KRI.
Ker se okužbe s HCV oseba največkrat sploh ne zaveda, jo lahko zanesljivo dokažemo samo z mikrobiološkim testiranjem vzorca krvi. Najprej v mikrobiološkem laboratoriju ugotovijo, ali so v krvi testirane osebe prisotna protitelesa proti HCV (protitelesa anti-HCV). Ta se pojavijo v krvi od 8 do 12 tednov po okužbi, lahko pa celo šest mesecev po njej. Med vsemi znanimi virusnimi okužbami je »obdobje diagnostičnega okna« najdaljše prav pri HCV. Če je presejalni test na protitelesa anti-HCV negativen, potem testirana oseba nima hepatitisa C, razen, če obstaja utemeljen sum, da gre za akutni hepatitis C oziroma za osebo, ki ima zelo oslabljen imunski odziv. To so izjemni primeri in so izredno redki, saj ima po izkušnjah več kot 99% vseh na novo odkritih okuženih ljudi kronično obliko hepatitisa C.
Če je test na prisotnost protiteles anti-HCV pozitiven, to še ne pomeni, da ima preiskovanec hepatitis C. Približno četrtina okuženih s HCV odstrani virus iz telesa in se samodejno pozdravi, za kar poskrbi njihov lastni imunski odziv. Torej pozitivni anti-HCV test lahko pomeni dvoje; ali gre za oseb,o ki je v preteklosti prišla v stik z virusom HCV in je okužbo že prebolela, ali pa za osebo, ki je še vedno okužena s HCV in ima najverjetneje kronični hepatitis C. Ti dve skupini oseb lahko med seboj razlikujemo le z dodatnim testiranjem na prisotnost virusne nukleinske kisline ali HCV RNA. Test poznamo tudi pod imenom verižna reakcija s polimerazo (PCR).
Če ima testirana oseba prisotna le protitelesa anti-HCV in v dveh zaporednih vzorcih, odvzetih v šest mesečnem razmiku, ne dokažemo prisotnosti HCV RNA (test PCR je negativen), je testirana oseba prebolela hepatitis C in ni več okužena s HCV. Če pa pri testirani osebi ob dokazani prisotnosti protiteles anti-HCV odkrijemo še prisotno HCV RNA (test PCR je pozitiven), gre skoraj zanesljivo za kronično okužbo s HCV. V izjemno redkih primerih bi lahko šlo za obdobje akutnega hepatitisa C.
